克隆基因檢測(cè)簡(jiǎn)介

克隆形成測(cè)定或菌落形成測(cè)定是一種體外 細(xì)胞存活測(cè)定，可評(píng)估單細(xì)胞在治療中存活并繁殖以形成菌落1的能力。最初開發(fā)克隆形成試驗(yàn)是為了研究輻射對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的影響。最近，它們已被廣泛用于測(cè)試抗血管生成劑和細(xì)胞毒劑、化學(xué)療法和基于細(xì)胞因子的藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞2的功效。

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使用 CytoSMART Omni 活細(xì)胞成像儀，您可以分析和量化集落形成。在此處了解有關(guān) Omni 的更多信息。

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用于分析集落形成的活細(xì)胞成像

活細(xì)胞成像可以解決傳統(tǒng)克隆方案的缺點(diǎn)。首先，活細(xì)胞成像允許長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)測(cè)菌落生長(zhǎng)，而不會(huì)將數(shù)據(jù)采集限制在單一時(shí)間點(diǎn)。這允許收集有關(guān)特定治療后細(xì)胞存活的更多信息，并實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞分裂和集落形成。通過(guò)連續(xù)成像，可以在更早的發(fā)育階段檢測(cè)到菌落形成，從而比采用傳統(tǒng)方法更快地得出結(jié)論。沒有端點(diǎn)固定或染色 步驟進(jìn)一步減少了進(jìn)行克隆形成測(cè)定所需的時(shí)間和材料。此外，集成的圖像分析軟件會(huì)自動(dòng)檢測(cè)新形成的菌落并評(píng)估其大小和圓形度。這不僅加速了數(shù)據(jù)分析，而且減少了分析結(jié)果解釋中的偏差和主觀性。

在下面的示例中，使用 CytoSMART Omni 對(duì)經(jīng)過(guò)一系列阿霉素濃度處理的 CHO-K1 細(xì)胞進(jìn)行了為期 7 天的成像。該測(cè)定在24孔板中進(jìn)行，該板保持在37℃的標(biāo)準(zhǔn)CO 2培養(yǎng)箱內(nèi)。

使用 CytoSMART 菌落檢測(cè)算法，在單個(gè)孔中形成的細(xì)胞簇（即菌落）被自動(dòng)量化（圖 1A）并以橙色突出顯示（圖 1B）。這允許在整個(gè)潛伏期 (圖 2A ) 中監(jiān)測(cè)和量化細(xì)胞增殖和集落形成, 而不會(huì)錯(cuò)過(guò)任何關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn), 因?yàn)樗ǔ０l(fā)生在使用傳統(tǒng)方法進(jìn)行克隆化檢測(cè)時(shí)。該算法還跟蹤菌落大?。▓D 2B）和圓度（圖 2C）的變化。

圖 1 | 未經(jīng)處理的 CHO-K1 細(xì)胞在 7 天內(nèi)的集落形成能力分析。(A) 集成菌落檢測(cè)算法自動(dòng)檢測(cè)并計(jì)算每孔的菌落數(shù)。(B) 放大特定井后，菌落掩碼覆蓋突出顯示單個(gè)細(xì)胞簇。

圖 2 | 多柔比星在體外可減少 CHO-K1 細(xì)胞的增殖和集落形成。(A) 測(cè)試板的輪廓。(B)未處理 (CTRL) CHO-K1 細(xì)胞和用 0.2 μM、0.5 μM、1.0 μM、2.0 μM 和 5.0 μM 阿霉素處理的細(xì)胞的存活曲線，以及 (C) 平均菌落大小和 (D) 的變化) 約 7 天的循環(huán)。

參考

1. Franken, N. A. P., Rodermond, H. M., Stap, J., Haveman, J. & van Bree, C. Clonogenic assay of cells in vitro. Nat. Protoc. 1, 2315–2319 (2006).

2. Munshi, A., Hobbs, M. & Meyn, R. E. Clonogenic Cell Survival Assay BT - Chemosensitivity: Volume 1 In Vitro Assays. in (ed. Blumenthal, R. D.) 21–28 (Humana Press, 2005). doi:10.1385/1-59259-869-2:021.